تولیدکیموزین کامل و پردازش یافته نوترکیب درE-coli و ارزیابی میزان بیان پری‌پلاسمی و فعالیت آنزیماتیک آن‌ها

سابقه و هدف: تا سال 1990، رنت (پروتئازهایی که باعث لخته شدن شیر و تولید پنیر می‌شوند) با روش قدیمی از شیردان گوساله‌های شیرخوار، یا از منابع گیاهی و یا میکروبی تهیه می‌گردید. در این سال اداره غذا و داروی آمریکا اجازه تولید و مصرف کیموزین گاوی نوترکیب تولید شده توسط باکتری‌ها را صادر کرد. امروزه بیش از 90 درصد پنیر مصرفی در انگلستان از کیموزین نوترکیب تولید می‌شود. این تحقیق به منظور قطع وابستگی کشور به مایه پنیر وارداتی، بررسی بیان و عمل‌کرد فرم اسپلایس یافته ژن کیموزین (فرم فاقد اگزون 6) به منظور بدست آوردن آنزیم کوچک‌تر و فعال‌تر همچنین بررسی عمل‌کرد سیگنال pelB در هدایت پروتئین به فضای پری‌پلاسم باکتری E-coli انجام گردید. مواد و روش‌ها: با استخراج mRNA از لایه پوششی معده گوساله و انجام RT-PCR دو فرم از پرپروکیموزین (فرم پردازش یافته فاقد اگزون 6 و فرم کامل پرپروکیموزین ) بدست آمد. سپس با طراحی پرایمرهای مناسب هر دو فرم پروکیموزین در وکتور بیانی pET26b کلون گردید. بیان با وسترن بلات تا یید گردید و عمل‌کرد آن‌ها بررسی شد. یافته‌ها: هر دو فرم ژن پروکیموزین در وکتور pET26b تولیدگردیدند. میزان تولید فرم پردازش یافته 7 برابر فرم کامل بود. هر دو فرم پروکیموزین باعث رسوب پروتئین‌های شیر شدند. نتیجه‌گیری: از آنجا که فرم پردازش یافته و کامل پروکیموزین بعد از شوک اسمزی در فضای پری‌پلاسمی مشاهده نشدند. بنابراین سیگنال pelB قادر به هدایت هیچ یک از آن دو به فضای پری‌پلاسم نیست. بنابراین بایستی سیگنال جدیدی طراحی گردد.